（5） 无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作之部位（待检物例外），然后打开紫外灯杀菌30分钟，时间一到，关闭紫外灯待用。
（6） 进入无菌室前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。
（7） 操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。
器材及场所的灭菌消毒
微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同的对象采用不同的处理方法。
1． 高压蒸汽灭菌: 工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时,当然不同的培养基有不同的要求,应分别处理。
2． 火焰灭菌： 接种针、接种环等可直接火焰灭菌。
3． 高温干燥灭菌： 各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃灭菌2小时。
4． 一 般消毒: 无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒。
5． 空气的消毒： 开启紫外灯照射30―60分钟 即可。
准备工作
1． 先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30―60分钟。
2． 检验用的有关器材， 搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒。
3． 操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室。
4． 进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作。
改革开发以来，随着外资及民营企业的迅速发展，洁净空调技术在微电子工业、医药卫生及食品工业等行业得到了广泛的应用，越来越多生产工艺工程师、工程技术人员接触并认识了洁净室。洁净室的相关从业人员也呈现几何数级增长，但是多数并未真正认识到洁净室的具体应用。
1、污染物质
了解洁净室首先需要了解污染物，洁净室技术的主要控制对象就是对室内洁净环境产生影响的室外污染物质，包括粉尘、烟、烟雾、化学污染物、微生物等。对大气尘来说，其中小于1μm的粒子数约占总粒子数的99%，但其质量分数约占3%；10μm以上的粒子数很少，但其质量分数可达80%，一般要求的洁净室关注的是0.5μm的粒子，浓度检别采用计数法。
污染物的来源分室外大气及室内产尘，其中室内产尘人是主要控制对象，人活动时的发尘量比静止时大好几倍。参考如下表：
2、洁净度级别
洁净室的级别的选择，对业主的投资预算有至关重要的影响。业主、设计方、施工承包商都必须了解规范或ISO标准中那些不必要的变量、因素对于花费的影响。
国际污染物控制学会联盟（ICCCS） 协调国际标准化组织（ISO）早已制定了ISO-14644标准，我国采用的GB50073-2001洁净室级别标准与IS0标准是一致的。故建议各从业人员从FS-209E对洁净室级别的表述转变为ISO标准或国标标准，参考如下表。
生物洁净室是在工业洁净室的基础上发展起来的，所以其标准也往往以工业洁净室标准为基础，再规定空气中允许的微生物浓度。现有标准允许的细菌浓度包括浮游菌浓度及沉降菌浓度两种。参考以下GMP标准。
建造条件编辑
1.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。
2.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。
3.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新洁尔灭溶液，等等。
4.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。
5 需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。
6.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。
7.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70%的酒精棉球消毒外表面。
8.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。
9.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。
10.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。
11.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。
12.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3%的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。
13.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水下冲洗，严禁污染下水道。
14.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行消毒，直至重复检查合乎要求为止。
空气净化编辑
无菌室空气净化工程是属于生物净化工程的一种，一般无菌室要求的洁净度为万级，标准的微生物检测实验室都会专门开辟5~8个平方出来建造无菌室，无菌室只要够放置实验室样品及必需的设备即可，面积无需过大而造成浪费，面积过大对于做无菌室空气净化工程来说不仅仅是提高建造成本而已，日后的运行及维护费用也会高的令人惊讶。一般微生物检测按照实验室行业要求都需要在无菌室中进行，很多食品菌、微生物等都是在超净工作台中完成检测和化验的。
随着社会科技发展，国家越来越重视食品安全问题，无菌室空气净化工程也在不断的普及。有了无菌室净化工程，将超净工作台放置于无菌室内操作，使实验环境更加洁净，实验样品不易于被污染。
无菌室内配置了百级超净工作台也并不是所有细菌都可以进行实验的，一般常规的菌落总数、微生物培养、血细胞培养、研究、干细胞研究、大肠菌等实验可以在百级超净台进行。但是如果需要做致病细菌，为了达到保护实验室人员的安全问题，就必须得建造生物安全实验室，使用生物安全柜进行实验。该类实验不能在普通的无菌实验室中进行。
工作人员进入无菌实验室要穿无菌衣、帽、口罩和鞋，非工作人员不得随意进入。
.无菌室应该有工作浓度的消毒液，并配备紫外灯进行空气消毒，定期使用适宜的消毒液灭菌清洁，无菌室设计，保证无菌室的洁净度符合要求。
无菌实验室要保持清洁，严禁堆放杂物，手术无菌室，以防止污染。每天要进行湿式小扫除，无菌室，每周大扫除，药厂无菌室，每月进行空气和试验台表面的xi菌学检测，各项指标控制在标准范围内。
要防止灭菌器材和培养基污染，已污染的就要停止使用；需要带入无菌实验室的仪器、平皿等物品都要包扎严密，并采用适宜的方法灭菌；供试拼在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以免污染，并消毒外表面。
无菌实验室要保持清洁，操作完毕后要清理无菌室，消毒、擦拭台面，不存放与实验无关的物品，再用紫外灯辐照灭菌。
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